SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO)

RNA凝膠染料

產(chǎn)品標簽

SYBR Green II；GoldView；Acridine Orange 吖啶橙；GelRed； GelGreen；溴化乙錠（EB）；SYBR Green I；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

SYBR Green II是目前已知電泳凝膠中RNA檢測較靈敏的染料之一，在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中低檢到100pg RNA或ssDNA的單一條帶（使用254nm紫外反射光源照射，并用寶麗來667黑白膠片和SYBR濾光片拍照）。即使用300nm透射光也能檢測到500pg RNA的單一條帶。SYBR Green II的靈敏度明顯強于溴化乙啶（EB）。標準瓊脂糖迷你膠EB低檢出1.5ng單鏈核酸的單一條帶（使用300nm透射光照射并用橙-紅明膠濾光片拍照）。

SYBR Green II在變性瓊脂糖/甲醛凝膠和聚丙烯酰胺/尿素凝膠中的檢測靈敏度有點降低，然而仍優(yōu)于EB。為了獲得大的檢測靈敏度，瓊脂糖/甲醛凝膠必須在EB染色前清洗數(shù)小時。相反，不做任何的清洗或脫色步驟，用SYBR Green II染色的瓊脂糖/甲醛凝膠或聚丙烯酰胺/尿素凝膠能檢測到1ng RNA單一條帶（254nm反射照明）和4ng RNA單一條帶（300nm透射照明）。SYBR Green II在RNA檢測具備這一靈敏度的特性歸因于幾個因素，包括*的熒光量子產(chǎn)量、結(jié)合能力和熒光增強。

本品為溶于DMSO 的10,000×的SYBR Green II RNA核酸染料，可用于：1）Northern Blot、起始位點作圖或cDNA制備前對RNA產(chǎn)物的小量分析；2）高分辨率變性梯度凝膠電泳（DGGE）后對5S rRNA遷移方式的觀察；3）單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）中的DNA染色；4）PCR擴增前對DNA染色。

注意事項

• 必須警告用戶注意，目前尚無關(guān)于SYBR Green II 對人體的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該染料與核酸結(jié)合，應當被看作潛在誘變劑，使用時要小心謹慎。在處理DMSO儲存液時應特別小心，因DMSO能促進有機分子進入組織。強烈建議處理DMO儲存液需戴雙層手套。和所有的核酸染料一樣，含SYBR Green II RNA核酸染料的溶液需先穿過活性炭再丟棄?；钚蕴恐蟊仨毞贌齺砥茐娜玖?。
• SYBR Green II可通過乙醇沉淀法從核酸中去除。異丙醇沉淀法去除效果稍差些。正丁醇萃取、氯萃防取和酚萃取法無法有效去除該染料。
• 先用EB染色的凝膠可接下來用SYBR Green II染色，根據(jù)電泳后染色（post-staining）的標準步驟操作。與直接用SYBR Green II染色相比較可能靈敏度有些降低。
• 不要在玻璃器皿中稀釋SYBR Green II儲存液，因其會結(jié)合到玻璃上。在聚丙烯器皿中稀釋儲存液。
• SYBR Green II不會干擾酶反應。
• 當用SYBR Green II染Northern或Southern Blot凝膠，建議在預雜交液和雜交液內(nèi)加入0.1%-0.3% SDS。
• 不建議用254nm紫外透射儀對凝膠拍照，因紫外光源的輪廓會出現(xiàn)在照片上。需要使用允許525nm光透過且排斥其他波長光的濾光片。
• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
• 光譜特征

SYBR Green II RNA核酸染料可用常見的紫外反射和透射激發(fā)光源，以及手持式紫外燈檢測。SYBR Green II的大激發(fā)波長為497nm，但還有一個二級激發(fā)峰集中在254nm附近。與RNA結(jié)合的SYBR Green II的熒光發(fā)射集中在520nm。這些光譜特性讓SYBR Green II適用于多種凝膠檢測儀，從紫外反射（上紫外）和透射儀（下紫外）到氬離子激光器和水銀燈激發(fā)的凝膠掃描儀。

使用方法

一、使用前準備工作

使用前將本品取出并回溫至室溫，使DMSO*解凍、溶液均一。于離心機上短暫離心確保所有溶液到管底。*次使用時可將本品分裝成多個小份后凍存，小份染料能更快溶解。

二、 染色方法

1．電泳后染色（后染，推薦）

2．電泳前染色（預染）

三、 觀察和凝膠成像

3.1 使用300nm紫外透射光或254nm紫外反射光（靈敏度更高）照射染色凝膠。

3.2 為了加靈敏度，建議使用黑白膠片，可用的SYBR Green照相濾光片（Thermo fisher, #S7569）拍照。許多其他的黃色或綠色明膠或玻璃紙濾光片也能用來拍照，但絕大多數(shù)可能會減低靈敏度。EB染色凝膠拍照用的橙-紅濾光片不適合于SYBR Green II染色凝膠。

3.3 用的SYBR Green照相濾光片（Thermo fisher, #S-7569）和Polaroid 667黑白膠片對凝膠進行拍照。染色凝膠基本無背景熒光，當檢測少量RNA，允許長期膠片曝光。對于300nm透射，通常F-stop設(shè)置4.5時曝光1-2s足夠。對于254nm反射（特別是手持燈），大約需要曝光1-1.5min以得到大靈敏度。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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